EGFR

Receptor tyrosine kinase binding ligands of the EGF family and activating several signaling cascades to convert extracellular cues into appropriate cellular responses. 
Mw; 134,000

泳動結果

EGFRは高分子量(135 kDa) であるため，低濃度ゲルが適しています。

SDS-PAGEでは取り扱える強度の最低は5％くらいなので，
5％ポリアクリルアミド，25 µM Mn²⁺–Phos-tagで解析しました（左）。
EGF刺激によって，EGFRがリン酸化し，シフトアップしているのはわかりますが，
複数のリン酸化バンドが重なっているように見えます。

次に，さらに低濃度の3.5％ゲルで解析しましたが，
ゲル強度が弱くて扱いにくいので，0.5％のアガロースを混ぜて補強しました（右）。
こちらでは，リン酸化したバンドが６本見えます。

 

Zn²⁺–Phos-tag SDS-PAGEでのEGFR解析例もあります。

関連画像

EGFR( Zn²⁺–Phos-tag SDS-PAGE)

 

Reference	Kinoshita, E., Kinoshita-Kikuta, E., and Koike, T. Separation and detection of large phosphoproteins using Phos-tag SDS-PAGE. Nature Protocols, 9, 1513–1521 (2009)  doi:  10.1038/nprot.2009.154 Supplemental data
ゲルの条件	1. Mn2+–Phos-tag:　25µM Polyacrylamide: 5%(w/v) 2. Mn2+–Phos-tag:　25µM Polyacrylamide: 3.5%(w/v)    + Agarose 0.5%(w/v)
検出方法	WB: anti-EGFR

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